介导pcDNA-IGF-1质粒转染骨髓间充质干细胞两种方法比较

       摘要: 目的比较阳离子聚合物Xfect与PDS-1000基因枪系统转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的转染效率及两种方法对细胞增殖能力的影响。方法应用贴壁法原代培养hBMSCs,取第3代细胞以流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD34、CD45、CD90,并分别用Xfect与PDS-1000基因枪系统将pcDNA-胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒转导入hBMSCs中。转染后在不同时间点使用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,计数阳性细胞,计算细胞转染率及细胞漂浮率;以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测IGF-1分泌量。结果 hBMSCs培养成功后,高表达CD29、CD90,低表达CD34、CD45。在转染后1、2d,两种方法细胞转染率差异有统计学意义(t=4.734、5.324,P〈0.05)。两种方法转染后细胞IGF-1分泌量均较转染前增加,但两种方法间比较差异有统计学意义(t=2.220-10.678,P〈0.05)。两种方法转染均有部分细胞脱落。结论两种方法均可将pcDNA-IGF-1基因转染入hBMSCs内,转染后细胞能分泌IGF-1。Xfect转染试剂转染效率较高,PDS-1000基因枪系统转染效率较低,两者对细胞都造成一定损伤。

作者:
薄建成 张海宁 杜青峰 姜岩 王英振 隋爱华
单位:
青岛大学附属医院关节外科 山东青岛266003
出处:
《青岛大学学报(医学版)》
刊期:
2016年第43卷第5期
基金:
国家自然科学基金资助项目(81171774,81272056)

介导pcDNA-IGF-1质粒转染骨髓间充质干细胞两种方法比较

摘要: 目的比较阳离子聚合物Xfect与PDS-1000基因枪系统转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的转染效率及两种方法对细胞增殖能力的影响。方法应用贴壁法原代培养hBMSCs,取第3代细胞以流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD34、CD45、CD90,并分别用Xfect与PDS-1000基因枪系统将pcDNA-胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒转导入hBMSCs中。转染后在不同时间点使用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,计数阳性细胞,计算细胞转染率及细胞漂浮率;以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测IGF-1分泌量。结果 hBMSCs培养成功后,高表达CD29、CD90,低表达CD34、CD45。在转染后1、2d,两种方法细胞转染率差异有统计学意义(t=4.734、5.324,P〈0.05)。两种方法转染后细胞IGF-1分泌量均较转染前增加,但两种方法间比较差异有统计学意义(t=2.220-10.678,P〈0.05)。两种方法转染均有部分细胞脱落。结论两种方法均可将pcDNA-IGF-1基因转染入hBMSCs内,转染后细胞能分泌IGF-1。Xfect转染试剂转染效率较高,PDS-1000基因枪系统转染效率较低,两者对细胞都造成一定损伤。

说明:如本页面涉及到版权问题或作者不愿意公开,请联系本站管理员删除!

[1] 冯佳 魏学燕 李闯 郭明雄 彭敏 宋启斌 韩光 . 肺腺癌细胞EGFR基因过表达和突变通过介导CXCR4/CXCL12信号通路表达导致肿瘤生物学行为改变的机制研究 [J]. 中国肺癌杂志 ,2018,7
[2] 王仁俊 周琴 未晓巍 李华 赵永斌 齐云峰 栾剑 周晓馥 . 室旁核内脂肪酸酰胺水解酶上调介导慢性心衰大鼠交感神经兴奋亢进 [J]. 中国病理生理杂志 ,2018,3
[3] 田华 高聪聪 郑冠琳 姚来彬 焦鹏 杨娜娜 孔雅茹 姚树桐 秦树存 . 氢分子通过激活自噬抑制C/EBP同源蛋白 介导的巨噬细胞凋亡 [J]. 中国病理生理杂志 ,2018,8
[4] 王授衔 陈德伟 高文祥 徐刚 吴刚 陈建 高钰琪 . HIF-1α介导低氧诱导的内皮细胞Brm表达上调的机制研究 [J]. 中国病理生理杂志 ,2017,4
[5] 姜晓琳 张立德 . 脾气虚证模型大鼠中BNP介导的cAMP-PKA信号通路对bFGF表达的影响 [J]. 中国病理生理杂志 ,2016,2
[6] 裴浩天 杨绍楠 马爱军 潘旭东 董轶 殷霜霜 . miR-155介导PI3K/Akt/mTOR自噬通路对ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块的影响 [J]. 青岛大学学报(医学版) ,2018,3
[7] 徐艳华 刘泉波 张祯祯 . 肠道病毒71型(EV71)通过网格蛋白介导的内吞途径入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞 [J]. 细胞与分子免疫学杂志 ,2017,6
[8] 曾红波  黄波  李兵峰  高风华  刘庆华  陈凯  杨文伦 . 鱼腥草注射液介导p38MAPK信号转导诱导人肝癌程序性死亡 [J]. 名医 ,2016,7
0.624391s