免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白

       摘要: 目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种。结论与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础。

作者:
李朝华 胡明 钱冬萌 王斌
单位:
青岛大学基础医学院病原生物学系 山东青岛266071
出处:
《青岛大学学报(医学版)》
刊期:
2018年第54卷第1期
基金:
国家自然科学基金面上项目(81471958)

免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白

摘要: 目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种。结论与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础。

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