摘要: 目的 研究在氧糖剥夺(OGD)条件下,向脑血管内皮细胞(RBEC)中加入提取自脂多糖(LPS)刺激的大鼠小胶质细胞上清液的循环微囊泡(MV),考察其对RBEC紧密连接功能的损伤及作用机制.方法 分离提取1 mg/L LPS刺激24h的小胶质细胞培养上清液中的MV并进行鉴定,实时荧光定量PCR检测MV中微小RNA-27a (miR-27a)水平.RBEC分为正常对照组、正常对照组-MV组、OGD 6 h组、OGD-MV孵育组.免疫荧光细胞化学染色检测RBEC中紧密连接蛋白闭合蛋白(occludin)和密封蛋白5(claudin-5)的表达,Western blot法检测RBEC中occludin、claudin-5、Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)和p38的蛋白磷酸化水平,ELISA测定RBEC中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 MV形状为近似圆形双层膜结构,平均直径为150 nm,符合MV的形态学特征.与正常小胶质细胞相比,LPS刺激的小胶质细胞培养上清液的MV中miR-27a水平异常升高.与正常对照组相比,加入MV不会对正常细胞产生影响,当在OGD条件下,RBEC中紧密连接受到损害,occludin和claudin-5表达降低,而加入MV后,RBEC紧密连接破坏加重,occludin和claudin-5表达进一步降低,OGD组小胶质细胞occludin和claudin-5蛋白水平降低.与正常对照组相比,OGD组小胶质细胞TLR4及NF-κBp65、p38磷酸化水平增加,而OGD-MV孵育组中,TLR4和NF-κBp65、p38的磷酸化水平进一步升高,且IL-1β和TNF-α水平也明显增加.结论 LPS刺激小胶质细胞上清液MV中miR-27a水平升高,可致OGD条件下RBEC紧密连接损害进一步加重,可能与其上调TLR4表达及NF-κBp65、p38的磷酸化相关.
摘要：目的 研究在氧糖剥夺(OGD)条件下,向脑血管内皮细胞(RBEC)中加入提取自脂多糖(LPS)刺激的大鼠小胶质细胞上清液的循环微囊泡(MV),考察其对RBEC紧密连接功能的损伤及作用机制.方法 分离提取1 mg/L LPS刺激24h的小胶质细胞培养上清液中的MV并进行鉴定,实时荧光定量PCR检测MV中微小RNA-27a (miR-27a)水平.RBEC分为正常对照组、正常对照组-MV组、OGD 6 h组、OGD-MV孵育组.免疫荧光细胞化学染色检测RBEC中紧密连接蛋白闭合蛋白(occludin)和密封蛋白5(claudin-5)的表达,Western blot法检测RBEC中occludin、claudin-5、Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)和p38的蛋白磷酸化水平,ELISA测定RBEC中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 MV形状为近似圆形双层膜结构,平均直径为150 nm,符合MV的形态学特征.与正常小胶质细胞相比,LPS刺激的小胶质细胞培养上清液的MV中miR-27a水平异常升高.与正常对照组相比,加入MV不会对正常细胞产生影响,当在OGD条件下,RBEC中紧密连接受到损害,occludin和claudin-5表达降低,而加入MV后,RBEC紧密连接破坏加重,occludin和claudin-5表达进一步降低,OGD组小胶质细胞occludin和claudin-5蛋白水平降低.与正常对照组相比,OGD组小胶质细胞TLR4及NF-κBp65、p38磷酸化水平增加,而OGD-MV孵育组中,TLR4和NF-κBp65、p38的磷酸化水平进一步升高,且IL-1β和TNF-α水平也明显增加.结论 LPS刺激小胶质细胞上清液MV中miR-27a水平升高,可致OGD条件下RBEC紧密连接损害进一步加重,可能与其上调TLR4表达及NF-κBp65、p38的磷酸化相关.
说明：如本页面涉及到版权问题或作者不愿意公开，请联系本站管理员删除！
| [1] | 邹梓良 陆永利 杨红卫 . 脂多糖对大鼠尾核神经元L型电压门控钙通道 电流的影响和外源性2-AG的调制作用 [J]. 中国病理生理杂志 ,2018,8 |
| [2] | 丁雪丽 荆雪 田字彬 阎志程 杨林 陈文秀 . 脂多糖对HBsAg转染肝癌细胞核因子κB活化作用 [J]. 青岛大学学报（医学版） ,2016,1 |
| [3] | 张睿 李冰洁 李庆林 . 酸枣仁皂苷A对脂多糖诱导小胶质细胞活化的影响及神经保护作用 [J]. 中国临床药理学与治疗学 ,2018,2 |
| [4] | 杨绍臻 杜国盛 魏玉香 索龙龙 周林 封立魁 宋继勇 朱志东 郑永根 . 吞噬了PUVA处理的人脾脏凋亡细胞的未成熟树突状细胞抵抗脂多糖诱导的成熟作用 [J]. 细胞与分子免疫学杂志 ,2017,1 |
