摘要: 试验旨在构建犬α2干扰素(CaIFN-α2)大肠杆菌表达系统,并进行优化和筛选,评价其表达的重组犬α2干扰素的抗病毒活性.根据GenBank中CaIFN-α2的基因序列,按大肠杆菌密码子偏好性对CaIFN α2全基因序列进行优化与合成,连接至pET-32a表达载体中,构建pET-32a-CaIFN-α2重组表达质粒.设计1对含Nde Ⅰ/BamH Ⅰ酶切位点的特异性引物,克隆CaIFN-α2成熟肽基因,连接至pET-21a表达载体中,构建pET-21a-CaIFN-α2重组表达质粒.将两种重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果显示,表达产物均以包涵体形式存在.表达菌经超声破碎、变性、复性和分子筛层析后,得到纯化的CaIFN-α2蛋白,纯度约为90％.采用细胞病变抑制法在MDCK VSV系统中测定其抗病毒活性,结果显示,纯化后pET-32a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性为1.5×103 IU/mL,而纯化后pET-21a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性高达1.0×107IU/mL.本试验结果表明CaIFN-α2在pET-32a及pET-21a载体系统中均能成功表达,且具有抗病毒活性,但在pET-21a载体系统中表达产物的活性更高,试验结果为进一步开发和利用犬干扰素制剂奠定了基础.
摘要： 试验旨在构建犬α2干扰素(CaIFN-α2)大肠杆菌表达系统,并进行优化和筛选,评价其表达的重组犬α2干扰素的抗病毒活性.根据GenBank中CaIFN-α2的基因序列,按大肠杆菌密码子偏好性对CaIFN α2全基因序列进行优化与合成,连接至pET-32a表达载体中,构建pET-32a-CaIFN-α2重组表达质粒.设计1对含Nde Ⅰ/BamH Ⅰ酶切位点的特异性引物,克隆CaIFN-α2成熟肽基因,连接至pET-21a表达载体中,构建pET-21a-CaIFN-α2重组表达质粒.将两种重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果显示,表达产物均以包涵体形式存在.表达菌经超声破碎、变性、复性和分子筛层析后,得到纯化的CaIFN-α2蛋白,纯度约为90％.采用细胞病变抑制法在MDCK VSV系统中测定其抗病毒活性,结果显示,纯化后pET-32a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性为1.5×103 IU/mL,而纯化后pET-21a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性高达1.0×107IU/mL.本试验结果表明CaIFN-α2在pET-32a及pET-21a载体系统中均能成功表达,且具有抗病毒活性,但在pET-21a载体系统中表达产物的活性更高,试验结果为进一步开发和利用犬干扰素制剂奠定了基础.
说明：如本页面涉及到版权问题或作者不愿意公开，请联系本站管理员删除！
| [1] | 刘利群 . 冻干重组人脑利钠肽对心肌缺血患者氧化应激水平、炎症指标和疗效评估 [J]. 中国医学创新 ,2018,9 |
| [2] | 刘琼 . 低剂量重组人促红细胞生成素加铁剂治疗重度慢性充血性心力衰竭合并贫血的预后效果 [J]. 中国血液流变学杂志 ,2018,1 |
| [3] | 郑丽梅 张明亮 张桂霞 李婷婷 . 急性心肌梗死应用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物溶栓治疗分析 [J]. 中国血液流变学杂志 ,2016,3 |
| [4] | 何林全 刘家云 屈园利 刘西涛 李晓东 龙铟 . 重组大鼠高迁移率族蛋白B1 A结构域(HMGB1-A)的原核表达及纯化 [J]. 细胞与分子免疫学杂志 ,2017,9 |
| [5] | 邹艳萍 . 重组人表皮生长因子联合人血白蛋白治愈溃疡期压疮的护理 [J]. 航空军医 ,2018,8 |
| [6] | 李大莉 . 重组人干扰素α-2b栓结合苦参凝胶治疗HPV的临床疗效观察 [J]. 中国误诊学杂志 ,2018,7 |
| [7] | 康昭 . 重组人白介素 -11（Ⅰ）治疗恶性肿瘤化疗后血小板减少症的临床观察 [J]. 名医 ,2018,1 |
| [8] | 张丽洁 . 重组人脑利钠肽治疗心力衰竭的效果观察 [J]. 维吾尔医药 ,2018,5 |
