独蒜兰乙酸乙酯萃取物通过内源性线粒体通路诱导白血病K562细胞和HL-60细胞凋亡

       摘要: 目的:探讨独蒜兰乙酸乙酯萃取物对人慢性粒细胞白血病K562细胞和急性髓性白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响以及诱导凋亡的途径.方法:采用XTT法、台盼蓝拒染法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、4,,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和Western blot 法研究不同浓度独蒜兰乙酸乙酯萃取物对上述2种白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期和凋亡相关蛋白表达等方面的影响.结果:独蒜兰正丁醇萃取物对K562细胞活力几乎没有抑制作用,而乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞的活力和增殖.乙酸乙酯萃取物对于HL-60细胞作用24 h 的半数抑制浓度(IC50)为(42.14 ±2.54)mg/L,对于K562细胞的IC50为(51.28 ±3.12)mg/L.Annexin V-FITC/PI和DAPI染色结果显示,乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性诱导2种细胞凋亡,且50 mg/L的乙酸乙酯萃取物作用后K562细胞的凋亡率为33.1%,而HL-60细胞的凋亡率为63.1%,说明HL-60细胞对乙酸乙酯萃取物更加敏感,伴有典型的细胞核凋亡形态学改变.PI染色结果显示HL-60细胞和K562细胞都被阻滞于G2期.Western blot结果显示,随着药物浓度的升高,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达降低,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达逐渐升高,内源性线粒体凋亡的特征胞浆中细胞色素C和凋亡诱导因子表达也逐渐升高.结论:独蒜兰乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞增殖,并通过触发内源性线粒体凋亡通路诱导这2种细胞凋亡.

作者:
郝岗平 郝佳丽 李悦 赵法兴 张媛英 蒋汉明 杨中法
单位:
泰山医学院基础医学院,山东泰安,271000 江西中医药高等专科学校药学系,江西抚州,344000
出处:
《中国病理生理杂志》
刊期:
2018年第34卷第5期
基金:
国家自然科学基金资助项目(81570158) 山东省重点研发项目(2016GSF201199) 山东省高等学校科研计划项目(J14LK02)

独蒜兰乙酸乙酯萃取物通过内源性线粒体通路诱导白血病K562细胞和HL-60细胞凋亡

摘要:目的:探讨独蒜兰乙酸乙酯萃取物对人慢性粒细胞白血病K562细胞和急性髓性白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响以及诱导凋亡的途径.方法:采用XTT法、台盼蓝拒染法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、4,,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和Western blot 法研究不同浓度独蒜兰乙酸乙酯萃取物对上述2种白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期和凋亡相关蛋白表达等方面的影响.结果:独蒜兰正丁醇萃取物对K562细胞活力几乎没有抑制作用,而乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞的活力和增殖.乙酸乙酯萃取物对于HL-60细胞作用24 h 的半数抑制浓度(IC50)为(42.14 ±2.54)mg/L,对于K562细胞的IC50为(51.28 ±3.12)mg/L.Annexin V-FITC/PI和DAPI染色结果显示,乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性诱导2种细胞凋亡,且50 mg/L的乙酸乙酯萃取物作用后K562细胞的凋亡率为33.1%,而HL-60细胞的凋亡率为63.1%,说明HL-60细胞对乙酸乙酯萃取物更加敏感,伴有典型的细胞核凋亡形态学改变.PI染色结果显示HL-60细胞和K562细胞都被阻滞于G2期.Western blot结果显示,随着药物浓度的升高,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达降低,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达逐渐升高,内源性线粒体凋亡的特征胞浆中细胞色素C和凋亡诱导因子表达也逐渐升高.结论:独蒜兰乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞增殖,并通过触发内源性线粒体凋亡通路诱导这2种细胞凋亡.

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