摘要: 目的：设计一种筛选高效性多重聚合酶链反应（multiplex polymerase chain reaction，MPCR）公共引物的新方法。方法将3条正向引物和3条反向引物序列分别连接于一段人类β-actin基因序列5'和3'端，连接序列通过pMD19-T载体构建质粒模板，利用此构建的质粒模板可实现9对引物PCR扩增敏感性的筛选，实现了引物的高效筛选；其步骤包括：引物设计、插入序列的选择、酶切转化、质粒提取、敏感性检测。结果通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物得出实验结果，结果显示9对公共引物的重复敏感性有明显差异，其中2对引物两次敏感性检测均达到10 copies/μL，1对引物两次敏感性均是103 copies/μL。结论该方法适用于从多对引物中排除低效性引物，筛选出敏感性高的引物对。