摘要: 目的　从 DNA 甲基化开始，利用化合物诱导大鼠肺癌的模型进行研究，对肺癌发生过程中的甲基化异常开展全基因组筛选，探索ALX4（Aristaless-like Homeobox 4）基因的甲基化在肺癌的过程中，探索基因甲基化是否与肺癌有关。同时进一步通过文献检索，探索该基因表现出在大肠癌和乳腺癌组织高甲基化，通过对 ALX4 基因进行分析，探究其在肺癌组织、正常组织以及多种肿瘤细胞中的发展情况以及对该基因实际甲基化表达的影响。方法　利用甲基化特异性 PCR 法对肺癌组织、肺癌细胞株以及正常组织中的 ALX4 基因甲基化进行检测并观察它们的变化。利用 5 一杂氮 -2‘一脱氧胞普 (5-aza-dC) 等去甲基化药物处理肿瘤细胞，并通过 RT-P CR 分析肿瘤细胞中 ALX4 基因的表达情况，同时评价 ALX4 基因甲基化对其表达调控。组建 ALX4 低表达以及高表达的细胞模型，采用细胞增殖实验、流式细胞分析等具体实验方法。对在肺癌发生过程中ALX4 基因的功能做出初步的判断。结果　利用 MSP 方法对 ALX4 的肿瘤组织以及正常组织的甲基化进行分析结果表明，在 10 例正常组织没有表现出 ALX4 基因甲基化，甲基化发生率为 0%，20 例肺癌组织中出了 11 例 ALX4 基因的甲基化，发生的甲基化的概率为 55%；在肺癌组织以及正常组织 ALX4 基因的甲基化方面存在显著的统计学差异（P <0.05），同时为了证明 MSP 实验结果的确定性，对上述样品进行了 PCR 产物测序，MSP 电泳结果与所得测序结果一致。使用 MSP 方法对一系列 ALX4 的基因甲基化的肿瘤细胞系进行分析。结果表明：8 种肿瘤细胞株出现补体程度的甲基化，MCF7 乳腺癌细胞株、Hela 宫颈癌细胞株SGC7901 胃癌细胞株、HCTl 16 结肠癌细胞株表现出完全甲基化；HepG2 肝癌细胞株、SW480 结肠癌细胞株、H446 和 A549 肺癌细胞株表现出部分甲基化现象。这些结果表明 ALX4 基因在肿瘤细胞中具有很高的甲基化的发病率。为了确定 ALX4 基因甲基化是否调节基因的表达，为此开展去甲基化相关药物实验，实验结果表明：H446、HepG、Hela、MCF7、HCTl 16等5例发生甲基化的肿瘤细胞株都出现了ALX4基因表达缺失，当使用了去甲基化药物后，ALX4基因的mRNA表达出现了显著提升。提示 DNA 高甲基化导致该基因在肿瘤中的表达沉默。结论　1 .ALX4 基因是在肿瘤细胞和肺癌组织中高度甲基化的，肿瘤恶性程度与其甲基化发生率呈负相关，这是诊断肺癌的候选相关标志物。2 ALX4 基因甲基化可以调节基因的表达，并且甲基化与表达表现出负相关程度。3 ALX4 基因能明显抑制肿瘤细胞的生长，初步研究表明，抑制肿瘤细胞生长的机理是 ALX4 基因可诱导细胞凋亡，是一种潜在的肿瘤抑制基因。