摘要: 本研究依据赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV) RNA2的序列，在其3′端设计反转录引物，在5′端设计 PCR 扩增引物，构建了一种可以评价 RNA链相对完整性的 RT-PCR 方法，命名为 LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR)，并对该方法的引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs 浓度、退火温度4个重要参数进行了优化。结果显示，优化后的 LR RT-PCR 反应体系为：引物浓度0.2μmol/L、Mg2+浓度4 mmol/L、dNTPs 浓度0.5 nmol、退火温度60℃。本研究建立的 LR RT-PCR 方法灵敏度高，可以检出1 pg 的 RGNNV RNA2标准品；该方法特异性强，与 RSIV 等鱼类常见病毒、鳗弧菌等常见水产病原菌以及石斑鱼 RNA 均不产生交叉反应。应用建立的 LR RT-PCR 方法对臭氧破坏 RGNNV RNA2的效果进行评价，发现当臭氧浓度由0.3 mg/L 依次增加为0.5、1.0、2.0 mg/L 时，LR RT-PCR 的扩增产物逐渐减少，直至消失。结果表明，建立的 LR RT-PCR 方法可以快速、准确地评价臭氧对 RGNNV RNA2的破坏效果，适用于养殖场评估臭氧对 RGNNV 的消毒效果，并对 RGNNV 进行检测和监控。
摘要：本研究依据赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV) RNA2的序列，在其3′端设计反转录引物，在5′端设计 PCR 扩增引物，构建了一种可以评价 RNA链相对完整性的 RT-PCR 方法，命名为 LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR)，并对该方法的引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs 浓度、退火温度4个重要参数进行了优化。结果显示，优化后的 LR RT-PCR 反应体系为：引物浓度0.2μmol/L、Mg2+浓度4 mmol/L、dNTPs 浓度0.5 nmol、退火温度60℃。本研究建立的 LR RT-PCR 方法灵敏度高，可以检出1 pg 的 RGNNV RNA2标准品；该方法特异性强，与 RSIV 等鱼类常见病毒、鳗弧菌等常见水产病原菌以及石斑鱼 RNA 均不产生交叉反应。应用建立的 LR RT-PCR 方法对臭氧破坏 RGNNV RNA2的效果进行评价，发现当臭氧浓度由0.3 mg/L 依次增加为0.5、1.0、2.0 mg/L 时，LR RT-PCR 的扩增产物逐渐减少，直至消失。结果表明，建立的 LR RT-PCR 方法可以快速、准确地评价臭氧对 RGNNV RNA2的破坏效果，适用于养殖场评估臭氧对 RGNNV 的消毒效果，并对 RGNNV 进行检测和监控。
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