新型鸭呼肠孤病毒σB 蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

       摘要: 为制备新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX 株σB 蛋白的多克隆抗体,试验经 RT-PCR扩增 NDRV XX 株σB 基因编码序列,构建原核表达质粒 pET-32a(+)-σB,将其转化至大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞后,经 IPTG 诱导获得 His-σB 重组蛋白。SDS-PAGE 显示成功表达出约55 ku 的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,其表达时的最佳诱导时间、IPTG 诱导浓度分别为3 h 和0.25 mmol/L。经 Ni2+柱亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,将蛋白经 Western blotting 和蛋白质谱鉴定为高纯度的σB 重组蛋白,将纯化后σB 重组蛋白按合理免疫程序免疫家兔,获得多抗隆抗体经 Western blotting 分析显示出特异性的反应。本试验结果为 NDRV σB 蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研发奠定了基础。

作者:
梅敏敏 梁国智 黄雯晶 李晓文 黄淑坚
单位:
佛山科学技术学院生命科学学院,佛山,528231
出处:
《中国畜牧兽医》
刊期:
2016年第43卷第12期
基金:
广东省家禽重大传染病控制技术研究(2012A020100001)

新型鸭呼肠孤病毒σB 蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

摘要: 为制备新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX 株σB 蛋白的多克隆抗体,试验经 RT-PCR扩增 NDRV XX 株σB 基因编码序列,构建原核表达质粒 pET-32a(+)-σB,将其转化至大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞后,经 IPTG 诱导获得 His-σB 重组蛋白。SDS-PAGE 显示成功表达出约55 ku 的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,其表达时的最佳诱导时间、IPTG 诱导浓度分别为3 h 和0.25 mmol/L。经 Ni2+柱亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,将蛋白经 Western blotting 和蛋白质谱鉴定为高纯度的σB 重组蛋白,将纯化后σB 重组蛋白按合理免疫程序免疫家兔,获得多抗隆抗体经 Western blotting 分析显示出特异性的反应。本试验结果为 NDRV σB 蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研发奠定了基础。

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