摘要: 为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式 RT-PCR (nested RT-PCR)方法,本研究参照 GenBank 中公布的 CSFV E2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以 CSFV 总 RNA 为模板,优化反应条件,建立 CSFV nested RT-PCR 方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验；利用所建立的方法对35份临床疑似 CSFV 感染样品进行了应用检测,并对阳性 PCR 产物进行克隆测序鉴定。结果表明,本研究成功建立了 CSFV nested RT-PCR 检测方法,能够特异性地扩增 CSFV,但对 ST 正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带；稳定性和重复性好；敏感性高,最低检测病毒含量为1 TCID50；自35份疑似 CSFV 感染样品中检出19份阳性样品,PCR 阳性产物克隆测序结果表明均为 CSFV E2基因片段。本研究成功建立了 CSFV nested RT-PCR 检测方法,可用于 CSFV 的快速检测,为 CSF 的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。