摘要: 试验旨在构建荷包猪猪白细胞抗原1(swine lymphocyte antigen 1,SLA 1)重链四聚体前体链并研究其在表达载体pET-21a(+)中蛋白的表达情况.以SLA-1全基因序列为模板,结合表达载体的特点设计引物,利用PCR扩增技术在SLA 1-HB01胞外区序列C-末端加载上可生物素酰化序列(BirA substrate peptide,BSP).将PCR扩增产物SLA-1-HB01 BSP克隆到pEASY T1载体上,筛选出阳性克隆菌SLA 1-HB01-BSP/pEASY T1,经双酶切后进一步与表达载体pET-2 1a(+)连接,再转化到E.coli BL21感受态细胞中构建pET-2 1a(+)/SLA-1-HB01-BSP重组表达菌,通过IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE检测蛋白的大小及表达情况,提取包涵体检测蛋白的纯度.PCR扩增结果显示,SLA-1-HB01-BSP大小为898 bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆至pEASY T1载体构建克隆菌,经NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切筛选及测序,成功获得阳性克隆菌株SLA-1-HB01-BSP/pEASY T1,插入的目的基因片段大小为876 bp.阳性克隆菌株与pET-21a(+)表达载体经NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切后进行连接,转化E coli BL21感受态细胞后获得pET-21a(+)/SLA-1-HB01-BSP重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小为31.4 ku.进一步检测分析发现,目的蛋白以包涵体形式存在,且蛋白纯度达到80％以上.本研究成功构建了荷包猪SLA-1-HB01重链四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达体系,为下一步进行猪SLA Ⅰ类分子四聚体的检测奠定基础.