摘要: 试验旨在构建猪β2肾上腺素能受体(β2 adrenergic receptor,β2 AR)基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达.通过猪基因组DNA克隆猪β2 AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)β2 AR,加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1(+)β2 AR.以真核表达载体为模板构建突变体myc pcDNA3.1(+)-β2 AR-D130N、myc-pcDNA3.1(+)-β2 AR C285S和myc pcDNA3.1(+)-β2 AR D130N/C285S,并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞,利用Western blotting技术验证其表达.结果显示,猪β2 AR基因已正确重组入pcDNA3.1(+)载体中;经测序鉴定,猪β2 AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺,第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸.Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达.本研究成功构建了猪β2 AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体,并验证其在HEK293T细胞中正常表达,为进一步研究猪β2 AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础.