摘要: 试验旨在构建山羊生长分化因子9 (growth differentiation factor 9,GDF9)慢病毒载体,并使其在山羊原代成纤维细胞中稳定表达.利用全基因合成法克隆了绵羊GDF9基因的CDS全长片段,长约1 362 bp,编码453个氨基酸.利用双酶切和连接,将GDF9基因片段亚克隆至慢病毒载体中,构建了过表达GDF9的慢病毒载体.将慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞后,获得了滴度为1×106 TU/mL的慢病毒.利用制备的GDF9慢病毒感染山羊原代成纤维细胞后,观察荧光表明,60％以上的细胞能够观察到红色荧光,说明制备的慢病毒对山羊原代成纤维细胞具有较高的感染效率.经过嘌呤霉素筛选后,所有的细胞均能观察到红色荧光.实时荧光定量PCR分析表明,制备的细胞系中GDF9表达水平比对照组高12.17倍,说明成功获得了稳定表达GDF9的山羊成纤维细胞系.本试验结果为进一步研究GDF9基因的生物学功能,以及山羊未来的种质资源创新奠定基础.