鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

       摘要: 本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法.根据GenBank中公布的GNDV F基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法.结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性.所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10 pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50 min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果.该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求.

作者:
刘文俊 黄运茂 阳佑天 许丹宁 曹楠 周德荣 田允波
单位:
仲恺农业工程学院,广东省水禽健康养殖重点实验室,广州510225 佛山科学技术学院,佛山,528000
出处:
《中国畜牧兽医》
刊期:
2018年第45卷第1期
基金:
广东省科技计划(2017A020208069) 广东省普通高校青年人才创新项目(20161076) 广东大学生科技创新攀登计划专项(pdjh2016b0243)

鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

摘要:本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法.根据GenBank中公布的GNDV F基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法.结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性.所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10 pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50 min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果.该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求.

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