摘要: 目的 克隆艰难梭菌毒素C(tcdC)基因并构建TcdC蛋白的原核表达载体,制备多克隆抗体.方法从艰难梭菌标准株(ATCC43255)基因组DNA中扩增获得tcdC基因的部分片段,连接到原核表达载体并转化到大肠杆菌中,诱导表达GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合蛋白,前者用作免疫抗原,后者用作检测抗原.采用SDS-PAGE法鉴定融合蛋白的表达,并通过Ni柱纯化IL1-TcdC/L融合蛋白,Q柱纯化GST-TcdC/L融合蛋白.将纯化的GST-TcdC/L融合蛋白于兔背部皮内多点注射,每只1 mg,4周1次,共3次.最后1次免疫后2周,采血分离血清.用IL1-TcdC/L蛋白包被酶联板,采用ELISA法检测多抗血清效价;Western蛋白印迹法检测多抗特异性.结果SDS-PAGE结果表明,所表达的2个融合蛋白与预期分子质量一致.ELISA结果显示,制备的TcdC多克隆抗体效价>1:6.4×104.Western蛋白印迹实验显示,制备的TcdC/L多克隆抗体能特异性识别艰难梭菌中的TcdC蛋白.结论成功克隆了艰难梭菌tcdC/L基因并进行了原核表达,成功制备了其多克隆抗体,为后续研究tcdC基因在艰难梭菌致病过程中的作用及机制奠定了基础.