摘要: 目的 研究表达和纯化大鼠未羧化骨钙素融合蛋白并鉴定其活性.方法 将大鼠的骨钙素(BGLAP)基因克隆到pSumo-Mut表达载体中,构建小泛素相关修饰物-骨钙素质粒(pSumo-BGLAP)并进行质粒酶切及测序鉴定.质粒在大肠杆菌的表达系统中转化后,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),11℃低温诱导方法,表达出小泛素相关修饰物-骨钙素(Sumo-BGLAP)融合蛋白.融合蛋白通过Ni亲和纯化方法被纯化,通过胰岛素分泌实验被鉴定生物活性.结果质粒的酶切及测序结果显示与目的基因的序列和蛋白分子量吻合,表明质粒pSumo-BGLAP构建成功.经转化、诱导和纯化后较高纯度的Sumo-BGLAP融合蛋白被获得.胰岛素分泌实验结果显示,16.7 mmol·L-1葡萄糖下,胰岛素分泌为(37.64±3.80) μU·L-1,16.7 mmol·L-1葡萄糖+0.03 ng·mL-1Sumo-BGLAP融合蛋白作用时,胰岛素分泌为(63.91±4.67) μU·L-1,16.7 mmol·L-1葡萄糖+0.3 ng·mL-1Sumo-BGLAP融合蛋白作用时,胰岛素分泌为(68.47±5.83) μU·L-1(均P＜ 0.01).结论 大鼠未羧化骨钙素的融合蛋白被成功表达和纯化,并且有生物活性,能用于进一步研究其对葡萄糖代谢的调节作用.

作者：

高璟英 任乐乐 丁亚琴 钟向琴 白涛 刘云峰 章毅

单位：

山西医科大学药理教研室,太原030001;山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室,太原030001;山西医科大学儿科医学系,太原030001 山西医科大学药理教研室,太原,030001 山西医科大学药理教研室,太原030001;山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室,太原030001;山西医科大学第一医院内分泌科,太原030001 山西医科大学第一医院内分泌科,太原,030001 山西医科大学药理教研室,太原030001;山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室,太原030001

出处：

《中国临床药理学杂志》

刊期：

2017年第33卷第9期

基金：

国家自然科学基金资助项目 山西省留学回国人员科技活动项目择优资助基金资助项目